Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩充

从第一次注意到胰脏自身抗纤到注意到1同型心血管疾病流行病学疼痛的的发展率在成人时期就有比较好的所述，多个胰脏自身抗纤特征性的成人里有70%在血清转换后10年底患上心血管疾病，而随访15年的成人这一数量减低到84%。比起之下，占到流行病学1同型心血管疾病一半以上的同型1同型心血管疾病的确诊机制还未想得到前提的学心法研究。

愈发多的人开始适用分期系统来定义1同型心血管疾病的的发展：个纤在注意到多种胰脏自身抗纤时进入第1阶段，注意到低血糖异常时进入第2阶段，注意到疼痛时进入第3阶段。一些多发胰脏自身抗纤特征性的个纤，在1期和2期，的发展极快，并发展为确诊的1同型心血管疾病。我们在此之后所述了一两组在首次检验到多种胰脏自身抗纤抽取后非常少10年无心血管疾病的极慢的发展者，这两组病征人数少，但特点非常明确。随后，我们发现胰脏诱发特异性CD8+T细胞内质反应在的发展减慢的病征里大纤不共存，但在近期确诊和长时间共存的心血管疾病病征里很不易检验到。这有可能说明了，与的发展病征比起，这些病征诱发的调节增强。

以前学心法研究说明了，尽管调节性T细胞内质(Treg)数量正常，但心血管疾病病征共存一些系统弱点，其里有数对IL-2的反应压制能力降低。此外，心血管疾病病征里的振荡CD4+T细胞内质有可能对调节更具抵抗性，表现为振荡T细胞内质的其会向西移动，自然导致的Treg和游离导致的其会Treg，以及免疫个人经历的CD4+T细胞内质里IL-2反应向西移动。本学心法研究的目标是所述了CD4+调节性T细胞内质(Treg)在一小群极减慢的发展者里的特点，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

法则：BOX学心法研究是一项以人群为基础的纵向学心法研究，在21岁表列出确诊的病征亲属里体检1同型心血管疾病的危险因素。我们在此之后所述了长时间减慢的发展者的特点，他们保持稳定多重胰脏自身抗纤特征性超过10年，但未注意到心血管疾病的流行病学疼痛，慢性或非开展性诱发。随后，10名一直保持稳定无心血管疾病并主动提供大量血液抽取的减慢的发展者扩及T和B细胞内质系统分析。在迄今的学心法研究里，8名慢的发展者(SP两组)，里位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的胰脏自身抗纤特征性。所有的参加者都处于1同型心血管疾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗纤对某些免疫的特征性反应，然而，一名病征已经处于2期非常少6年，但未注意到流行病学疼痛，一名病征被治疗为心血管疾病，该成年人72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在的测试里对该NAD开展了另行风险评估。分离外周血单个核细胞内质(PBMCs)，转用多参数流式细胞内质心法和T细胞内质其会试验风险评估NAD里Treg的基频、表同型和系统。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无指派聚类分析，风险评估Treg表同型。

结果：与卫生NAD比起，来自慢的发展纤的无意识CD4+T细胞内质的指派聚类说明了，酪氨酸的无意识CD4+ Treg基频减低，与阿托品其会的TNFR无关细胞内(GITR)强调减低有关。一名HbA1c上升的病征与的发展减慢者和归一化的对照两组比起，Treg谱各有各有不同。系统新发现，与卫生NAD比起，来自减慢的发展纤的Treg特异性的CD4+振荡T细胞内质其会显著损害。表现为对振荡CD4+T细胞内质CD25和CD134强调的其会减低。

平面图1 深入的表同型分析说明了，CD4+Treg亚同型在慢的发展所述符里减低。由FlowSOM转化的Treg四楼，涌进在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞内质上。根据标明物强调鉴定单单10个元簇:无意识T细胞内质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞内质;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内质;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)适用9个各有不同Treg标明转化的10个元簇的MST。每个结点都是一个一个大(100个一个大)，很大的元一个大(10个元一个大)在结点两组周围上色。每个结点里的粥平面图说明单个标明的强调行政级别。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整纤标明强调。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转化平面图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖物。(e-l)相比之下金属量为每个metacluster装点阵平面图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP两组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞内质(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞内质(l)。深金色带子都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 适用CITRUS的预测模同型证明，Treg基频的减低是的发展减慢的标志。标准依赖同型(a - f)和柑橘分析(g-k)相当SP参加者和归一化的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞内质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的都是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR强调开展分离，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及NADSP 606(深金色)里CD25+ cd127的基频简介平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖同型有界的装点阵平面图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度著色，箭头突单单的簇被标识为SP和HD所述符相互间的各有不同。(j)装点阵平面图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比之下金属量(数量)。(k)直方平面图说明了每个簇的表同型(粉红色)和Treg标明相比之下强调与背景强调(金色);上列，文件系统Treg_3;一个大一行，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇里标明的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验

平面图3 与卫生献血者比起，的发展减慢者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T细胞内质元簇(无意识T细胞内质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞内质;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内质;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个强调标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)所述符的强调热平面图(sp606不有数在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(深金色)的FlowSOM GITR强调联结，说明了直方平面图(c)和简介平面图(d)。Wilcoxon分组符号秩和检验，p< 0.07(深金色)所有NAD有数，p< 0.05(金色)NADSP 606和归一化的HD不有数在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR强调，从标准依赖同型，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(深金色)联结，说明了直方平面图(e)和简介平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检验

平面图4 来自减慢的发展的CD4+ treg细胞内质压制振荡CD4+T细胞内质的压制能力降低。SP两组用金色的该线和带子说明，HD两组用金色的该线和带子说明，深金色的该线/带子说明NADsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内质开展分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按通过观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内质，培植3天后开展流式细胞内质心法检验。(a-d)与CD4+；也者相比之下应的treg培植(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培植。(a,b,f) CFSE其会(a,e)和CFSE其会百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的其会百分比。适用特征性对照(酪氨酸的响应细胞内质下同treg)推算其会百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

平面图5 振荡CD4+T细胞内质对减慢的发展的T细胞内质再生的其会更引人注意。SP两组用金色的该线和带子说明，HD两组用金色的该线和带子说明，深金色的该线/带子说明NADsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内质开展分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按通过观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内质，培植3天后开展流式细胞内质心法(CD25反染)和细胞内质因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培植。(a,b) CFSE其会(a)和CFSE其会%-(b)。(c,d) CD25其会%-(c)和CD134其会%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植里的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们得单单的结论是，来自减慢的发展子的再生无意识CD4+Treg在GITR强调里想得到了扩展到和丰富，强调了全面学心法研究Treg在1同型心血管疾病安全性个纤里的异质性的重要性。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28